Склеродермия: общая картина. Анализ морфологических, иммуноморфологических показателей кожи больных очаговой склеродермией, находящихся в различных стадиях заболевания. Результаты проведенных исследований.
В.В.Савенкова, ГУ «Институт дерматологии и венерологии АМН Украины», г. Харьков
Введение
Среди заболеваний соединительной ткани значительное место занимает склеродермия. Склеродермия – системное прогрессирующее поражение соединительной ткани с преобладанием фиброзно-склеротических и сосудистых нарушений по типу облитерирующего эндартериолита с распространенными вазомоторными изменениями, развивающимися преимущественно в коже и подкожной клетчатке [1, 3]. Склеродермия характеризуется длительным, хроническим, прогредиентным течением с периодами ремиссий и обострений, что характерно для аутоиммунных заболеваний [11]. Большой клинический и научный материал свидетельствует о многообразии проявлений склеродермии [4, 10]. Однако, несмотря на проведенные многочисленные генетические, биохимические, иммунологические исследования [2, 12], до сих пор отсутствуют лабораторные показатели, позволяющие с высокой степенью достоверности оценить состояние больного и прогнозировать течение заболевания. Окончательно не разработаны критерии дифференциальной диагностики системной и очаговой форм склеродермии. Морфологические исследования кожи этой категории больных, включающие современные методики, немногочисленны и неоднозначны. В связи с изложенным, имеется необходимость поиска и разработки новых подходов к изучению патогенеза заболевания, созданию новых диагностических и прогностических тестов при склеродермии, что важно для своевременного патогенетически обоснованного лечения. Одним из таких подходов является анализ морфологических, иммуноморфологических показателей кожи больных очаговой склеродермией (ОСД), находящихся в различных стадиях заболевания. Это и явилось целью данного исследования.
Материалы и методы исследования
Морфологическое, гистохимическое, иммуноморфологическое и иммуногистохимическое исследование проведено на 49 биоптатах кожи пациентов, больных ОСД в подострой стадии заболевания в возрасте 19 – 65 лет. Давность заболевания колебалась от 4 месяцев до 27 лет. Группу контроля составили 10 здоровых добровольцев. Биопсии кожи в очаге поражения брались только с информированного согласия пациентов и добровольцев в аналогичных местах. Биоптический материал после фиксации в 10 % формалине подвергали парафиновой проводке и изготавливали серийные срезы толщиной 4-5 мкм. Препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, использовали для общей оценки состояния исследуемых тканей и структурного и функционального состояния соединительнотканных структур. С целью дифференцировки соединительнотканных волокон препараты окрашивали по методу Ван Гизон и Маллори, а эластические волокна – по Вейгерту. При оценке функциональной активности клеток и тканей использовали комплекс гистохимических методик. Дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) выявляли реакцией по Фельгену-Россенбеку (контроль – гидролиз с HCL). Рибонуклеиновую кислоту (РНК) выявляли окраской по методу Браше (контроль кристаллической рибонуклеазой). С помощью ШИКреакции по Мак Манусу Хочкису (контроль с амилазой) выявляли в клетках гликоген, а в тканях – нейтральные мукополисахариды (НМПС) [6, 7, 8, 9]. Изучение микропрепаратов проводили на микроскопе Оlympus ВХ-41 (Япония) с последующим видеомикроскопическим фотографированием. Иммуногистохимческое исследование проводили на парафиновых срезах, толщиной 5-6 мкм непрямым методом Кунса по методике М. Бросман [13]. Иммунные клетки дифференцировали с помощью моноклональных антител (МКА) к CD3, CD4, CD8, CD22, CD16, ИЛ-1 и ИЛ-2, (Сhemicon, usa). Клетки экспрессирующие рецепторы к hla-dr антигену определяли с помощью мка к hla-dr-антигену (chemicon, usa). относительные объемы иммунных клеток определяли в поле зрения (ув. 400) в пересчете на 100 клеток. коллагены типировали моноклональными антителами (мка) к коллагенам i, iv типов (novocastra laboratories ltd.). коллагены типа определяли мка к коллагену ііі типа (imtek ltd, Россия). Рецепторы к эндотелину-1 определяли с мка к эндотелину-1 (chemicon, usa). в качестве люминисцентной метки использовали f (ab)-2 – фрагменты кроличьих антител против иммуноглобулинов мыши, меченных фитц. препараты изучали в люминисцентном микроскопе люмам-и2 с использованием светофильтров: фс-1-2, сзс-24, бс-8-2, уфс-6-3. интенсивность свечения коллагенов и эндотелина определяли на микрофлюориметре с фэу-35 и выражали в условных единицах, равных току, протекающему через измерительный прибор, выраженных в микроамперах (мка). Вычислительная и статистическая обработка полученных результатов, а также их графическая интерпретация выполнена с помощью стандартного пакета прикладных программ “office professional xp” фирмы microsoft corporation и метода стьюдента-фишера [5].
Результаты и их обсуждение
Микроскопическое исследование кожи при подостром течении осд выявило значительное нарушение ее структуры и функции. эпидермис неравномерно, а кое-где значительно истончен. нижняя граница эпидермиса местами сглажена, кое-где отмечается выраженный гиперкератоз (рис. 1).вместе с тем, эпидермис в основном представлен все еще всеми слоями: роговым, зернистым, шиповатым (непостоянно) и базальным. не смотря на то, что во всех слоях эпидермиса в клетках определяются гранулы гликогена, в клетках шиповатого и базального слоев отмечаются явления гидропической дистрофии. Субэпителиальная базальная мембрана (бм) утолщена, интенсивно шик позитивная, местами с очагами деструкции. часто отмечается выраженный склероз и даже гиалиноз субэпителиальной соединительной ткани (рис. 2).. В сосочковом слое дермы сосочки часто сглажены, в некоторых случаях отмечаются еще признаки отека, в связи с чем он имеет сетчатый вид. в большей части случаев коллагеновые волокна утолщены, огрубевшие, интенсивно шик-позитивные (рис. 3), в связи с дезорганизацией при окрашивании по в ан гизон характеризуются только очаговой пикринофилией. эластические волокна несколько разрежены и неравномерно распределены на отдельных участках. между волокнами дермы обнаруживаются немногочисленные фибробласты. Сосуды сосочкового слоя дермы мелкие, в основном капиллярного типа, распределены неравномерно, характеризуются умеренно выраженным полнокровием. сосудистые стенки утолщены, при шик-реакции характеризуются интенсивным окрашиванием, что свидетельствует о продолжающемся плазматическом пропитывании. При гистологическом исследовании более глубоких отделов дермы установлено, что граница между сосочковым и сетчатым слоем дермы нечеткая, в последнем выражены признаки внутридермального отека . Количество клеточных элементов соединительной ткани также небольшое. вместе с тем, хотя в ретикулярном слое дермы отмечается набухание коллагеновых волокон, они, однако, сохраняют фуксинофильность при окрашивании по ван гизон , то есть их тинкториальные свойства сохранены . эластические волок кна сетчатого слоя отстоят друг от друга за счет отека соединительной ткани. В сетчатом слое дермы обнаруживаются частично сохраненные потовые и сальные железы, а такжее волосяные фолликулы, при этом они нередко атрофичны и окружены широкими кольцевидными разрастаниями плотной соединительной ткани (рис. 4).
Комментировать