Лечебные свойства березы. Изменения гистоструктуры, наступающие под воздействием ДБН и ДБО, установить степень эквивалентности их дерматотропной активности.
В.И. Ноздрин, А.С. Кинзирский, Т.А. Белоусова, О.И.Лаврик, Е.Г. Крутых, С.А. Жучков
Лечебные свойства березы известны давно. В той или иной форме в народной и в официальной медицине используются лекарственные средства, приготовленные из ее коры, листьев, почек и да- же паразитирующего на ее стволе гриба – чаги. Одним из таких продуктов является деготь березо- вый (ДБ), получаемый путем сухой перегонки бересты – наружного слоя коры дерева. ДБ имеет си- льный специфический запах, из-за которого, по-видимому, он фигурирует в пословицах (напр. «в каждой бочке меда есть ложка дегтя») и народных обычаях (пачканье ворот как форма выражения отрицательного отношения к человеку). Однако, несмотря на запах, ДБ вот уже около 2000 лет об- легчает страдания человека, а в дерматологии в течение последних 100 лет он прочно занимает свое место и входит в состав многих лекарственных прописей. ДБ обладает дезинфицирующим, инсектицидным и местнораздражающим действием, улучшает кровоснабжение тканей, стимулирует регенерацию эпидермиса, усиливает процессы ороговения и применяется в составе различных ма- зей и линиментов для лечения экземы, псориаза, трихофитии гладкой кожи, чесотки и др. кожных заболеваний (Машковский М.Д., 1993).
Широко известно, какую службу в хирургической практике сослужил Линимент бальзамический по А.В. Вишневскому, не утративший своей актуальности и в настоящее время. В середине прошлого века в связи с появлением на фармацевтическом рынке содержащих кортикостероиды препаратов популярность ДБ снизилась. Однако впоследствии, когда стали известны побочные эффекты и ос- ложнения кортикостероидной терапии, интерес к ДБ возродился. Несмотря на столь длительную историю применения ДБ в лечебной практике, в современной отечественной литературе мы не встретили работ, посвященных морфологическим изменениям в коже, вызванным аппликациями ДБ. В зарубежной литературе исследования такого рода единичны (Salfeld K. et al., 1965; Schweikert H. et al., 1972.). Несколько большее число работ посвящено морфологическим аспектам воздейст- вия на кожу каменноугольного дегтя (Leong L.Y., 1990; Salfeld K. et al., 1965; Schweikert H. et al., 1972; Bernd A. et al., 1990; Thami G.P. et al., 2002 и др.). Причину более широкого использования именно этого дегтя можно объяснить географической узостью ареала произрастания берѐзы боро- давчатой (Букштынов А.Д. и др., 1981). Деготь каменноугольный (ДК) обладает сходной с ДБ актив- ностью в отношении кожи, что определяет и сходные с ДБ показания к его назначению в клинике, в основном, для лечения псориаза и экземы.
ДБ представляет собой многокомпонентную природную композицию, состав которой полностью не установлен. В него входят фенолы, толуол, гваякол, крезол, креозол, теребен, ксиленол, салицило- вая кислота, бетулин (изучению фармакологических свойств бетулина в последнее время уделяет- ся большое внимание), полициклические ароматические углеводороды (в частности, бензпирен) и пр. Исходя из перечисленного выше, следует, что при лечении препаратами ДБ можно ожидать по- явления нежелательных побочных эффектов. В связи с этим на Фармацевтическом научно- производственном предприятии «Ретиноиды» была проведена работа по очистке ДБ от ряда поте- нциально опасных компонентов, в результате которой был получен ДБ (очищенная субстанция) – ДБО. Соответственно исходную субстанцию мы будем называть ДБ неочищенный (ДБН).
Цель исследования. Выявить изменения гистоструктуры, наступающие под воздействием ДБН и ДБО, установить степень эквивалентности их дерматотропной активности и обсудить полученные результаты в свете возможного объяснения механизмов лечебного эффекта ДБ.
Материал и методы исследования. Эксперимент выполнен на половозрелых самках беспородных крыс. Животные были разбиты на 7 групп по 5-6 особей в каждой:
- интактный контроль;
- аппликации ДБН в дозе 0,05 г/сут.;
- аппликации ДБН в дозе 0,1 г/сут.;
- аппликации ДБН в дозе 0,25 г/сут.;
- аппликации ДБО в дозе 0,05 г/сут.;
- аппликации ДБО в дозе 0,1 г/сут.;
- аппликации ДБО в дозе 0,25 г/сут.
Всем животным удаляли волосяной покров в межлопаточной области спины. Аппликации ДБН и ДБО проводили ежедневно в течение 2-х недель. Для взятия материала животных усыпляли пара- ми хлороформа. Фрагменты кожи фиксировали в расправленном состоянии в 10% формалине, де- гидратировали и заливали в парафин. Окрашенные гематоксилином и эозином гистологические срезы изучали с помощью светового микроскопа AXIOSCOP-2 (Zeiss). Морфометрические исследо- вания провели с применением компьютерных технологий на аппаратно-программном комплексе ДиаМорф (Россия) с использованием программы анализа видеоизображений CITO. Определяли толщину эпидермиса (до рогового слоя), клеточную плотность дермы, долю (в %) полей зрения из области субэпидермальных участков дермы, содержащих сосуды микроциркуляторного русла, от общего числа полей зрения, а также долю суммарной площади сосудов микроциркуляторного русла в общей площади дермы в расчете на одно поле зрения.
Результаты и обсуждение. Аппликации ДБН и ДБО вызывают визуально одинаковые изменения ги- стоструктуры кожи, развивающиеся во всех ее компонентах. Обращают на себя внимание частые митозы в базальном слое эпидермиса, значительное утолщение последнего и его гиперкератиниза- ция (рис. 1). Признаки нарушения целостности дермоэпидермального соединения и дистрофичес- кие изменения кератиноцитов в виде их вакуолизации единичны. Межклеточные соединения между эпителиоцитами в некоторых участках выглядят несколько расширенными. Дерма отечна, обильно инфильтрирована лимфоцитами и другими мононуклеарами по всей ширине, но особенно под эпи- дермисом. Сосуды микроциркуляторного русла расширены, заполнены форменными элементами крови, встречаются признаки диапедеза эритроцитов (рис. 1).
Рис. 1. Фрагменты кожи крыс интактной (а) и через 2 недели после начала ежедневных апплика- ций ДБО в количестве 0,05 г/сут. (б), 0,1 г/сут. (в) и 0,25 г/сут. (г). Эп – эпидермис, Д – дерма. Ув.: 40 х 0,5.
Обращает на себя внимания резкая редукция сальных желез вплоть до их полного исчезновения в препарате. Обнаруживаются также проявления трихотропного эффекта в виде разрастания воло- сяных луковиц и стенок волосяных фолликулов и глубокого проникновения рогового слоя в глубь фолликула, где корень волоса (а в устье фолликула и стержень) выглядят «замурованными» в пласты кератина (рис. 2).
Рис. 2. Фрагменты кожи крыс интактной (а) и через 2 недели после начала ежедневных апплика- ций ДБО в количестве 0,05 г/сут. (б), 0,1 г/сут. (в) и 0,25 г/сут. (г). ВФ – волосяные фолликулы, СЖ – сальные железы. Ув.: 20 х 0,5.
Морфометрические исследования подтвердили визуальные наблюдения. Так, толщина эпидер- миса через две недели аппликаций ДБН и ДБО оказалась достоверно выше, чем в контроле при ис- пользовании всех доз; дозозависимость эффекта проявляется в диапазоне от 0,05 до 0,1 г/сутки, а при дальнейшем повышении дозы практически не изменяется. При этом показатели обоих дегтей для каждого количества наносимой субстанции практически не отличались друг от друга (рис. 3).
Рис. 3. Толщина (в мкм) эпидермиса (до рогового слоя) кожи крыс через 2 недели аппликаций ДБН и ДБО. Слева демонстрируются измеряемые параметры.
Показатель клеточной плотности дермы был определен для субэпидермальных участков и подра- зумевал общее количество клеток, приходящееся на поле зрения микроскопа. Во всех опытных гру- ппах этот параметр был достоверно выше, чем в контроле; при этом при отсутствии различий меж- ду показателями, установленными для доз 0,05 и 0,1 г/сут., при дальнейшем увеличении дозы клеточная плотность дермы дозозависимо возрастает.
Обращает на себя внимание, что, так же, как и в отношении толщины эпидермиса присущие каждой дозе показатели клеточной плотности дермы при аппликациях обоих дегтей не обнаруживают ста- тистически значимых различий, то есть ДБН и ДБО биоэквивалентны и по этому параметру (рис.4).
Рис. 4. Клеточная плотность дермы через 2 недели аппликаций ДБН и ДБО. Сверху показаны этапы выделения клеток соединительной ткани, подлежащих подсчету.
Морфометрические исследования сосудов микроциркуляторного русла позволили установить, что количество полей зрения субэпидермальных участков дермы, в которых обнаруживаются сосуды, достоверно и практически одинаково увеличивается под влиянием аппликаций ДБН и ДБО во всех использованных дозах. Накожное нанесение ДБ в течение 2-х недель вызывает достоверное уве- личение доли суммарной площади сосудов микроциркуляторного русла в общей площади дермы в пересчете на поле зрения микроскопа (рис. 5). Выраженность сосудистой реакции на воздействие ДБН достоверно увеличивается в диапазоне доз от 0,05 до 0,25 г/сутки, а при аппликациях ДБО – до дозы 0,1 г/сутки, не меняясь в дальнейшем (рис.5).
Таким образом, имеет место тенденция более выраженной реакции сосудов микроциркуляторного русла на воздействие ДБН.
Рис. 5. Доля (в %) суммарной площади сосудов микроциркуляторного русла от общей площади
дермы в поле зрения микроскопа через 2 недели аппликаций ДБО и ДБН. Сверху демонстрируют- ся этапы выделения определяемых площадей.
Проведенное исследование показало, что ДБ в условиях накожных аппликаций приводит к увели- чению толщины эпидермиса с усилением его кератинизации, что, по всей вероятности, является отражением гиперпролиферативного процесса. Похожий эффект был получен Foreman M.I. и др. (1990) при аппликациях необработанного ДК на кожу безволосых хомячков (утолщение эпидермиса, возрастание индекса метки в клетках базального слоя, увеличение количества рогового вещества, атрофия сальных желез) и Thami G.P. и др. (2002) при аппликациях ДБ на неповрежденную кожу морских свинок (акантоз, гиперкератоз, дерматит, лимфоцитарные инфильтраты в верхних слоях дермы).
Гиперплазия эпидермиса через 2 недели аппликаций ДК была продемонстрирована и в образцах кожи человека (Leong H.Y., 1990); при этом автор отметил транзиторный характер гиперпластичес- кого процесса, в связи с чем конечный эффект от воздействия ДК на эпидермис был охарактеризо- ван им как атрофогенный. Непродолжительность акантоза, вызванного аппликациями ДК и ДБ, бы- ла продемонстрирована и в опытах на животных (Salfeld K. et al., 1965; Schweikert H. et al., 1972). Наш эксперимент не включал сроки исследования, которые могли бы позволить составить собст- венное мнение о продолжительности гипертрофии эпидермиса и о возможности развития впослед- ствии антипролиферативного эффекта. Результаты настоящего исследования свидетельствуют, что ДБ обладает способностью в определенном интервале доз стимулировать процессы пролифе- рации эпидермиса, уменьшать выработку кожного сала и модифицировать процесс волосообразо- вания. Это действие сопровождается расширением сосудов микроциркуляторного русла подлежа- щей соединительной ткани и ее инфильтрацией клетками мононуклеарного ряда. Известно, что функционально гетерогенные популяции лимфоцитов и макрофагов через свои цитокины способны контролировать процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза эпителиальных клеток (Земсков В.М. и др., 1990, 1997).
Таким образом, на этом основании можно полагать, что сосудистая реакция, клеточная инфильтра- ция и утолщение эпителиально-клеточного пласта эпидермиса являются взаимообусловленными процессами, и ДБ эти процессы активирует, что лежит в основе его специфической дерматотропной активности. ДБО в дозе 0,25 г/сутки вызывает достоверно менее выраженное увеличение доли ми- кроциркуляторного сосудистого русла в общей площади дермы по сравнению с аналогичным коли- чеством ДБН, что может характеризовать его как субстанцию с менее яркой провоспалительной активностью в сравнении с неочищенным дегтем.
Комментировать